高压灭菌器的工作原理主要是利用高压和高温来杀灭细菌和微生物。具体步骤如下：

首先，将需要灭菌的物品放入高压灭菌器的灭菌室内。

接着，关闭灭菌室的门并将灭菌室密封，确保内部环境不会外泄。

接下来，通过外部控制系统将高压灭菌器内的压力逐渐增加至设计要求的压力值。

同时，通过高效能的加热系统将灭菌室内的温度升高至高温状态，通常会达到121摄氏度以上。

在高压和高温的共同作用下，细菌和微生物的细胞膜会被破坏，细胞内的蛋白质和核酸会失去功能，从而达到杀灭的效果。

经过一定的时间后，关闭高压灭菌器的加热和压力系统，待灭菌室内的温度和压力降至安全范围后，打开灭菌室的门取出已灭菌物品。

通过以上的步骤，高压灭菌器能够有效地将物品中的细菌和微生物完全杀灭，保证物品的无菌状态。